结冷胶生产菌种的选育及发酵条件的优化

【摘要】本研究将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)转入结冷胶生产菌株少动鞘氨醇单胞菌SphingomonaselodeaJLJ中,使得菌株在低氧条件下的生长能力提高,最终结冷胶产胶率显著提高。首先,结合形态学特征、生理生化特征和16SrDNA序列的分析,确定菌株JLJ应为鞘氨醇单胞菌属少动鞘氨醇单胞菌。其次,从透明颤菌中克隆获得带有启动子序列的血红蛋白基因,将其转入菌株JLJ中获得转化子JLJ-VHb+,PCR鉴定、SDS-PAGE分析及CO差光谱分析结果表明血红蛋白基因在菌株JLJ中成功表达,且具有生物活性。最后,对改造菌株JLJ-VHb+的发酵培养基配方和发酵条件进行了优化。确定培养基配方为：蔗糖3%,黄豆饼粉0.5%,NaN030.1%,KH2P040.1%,K2HP040.15%,MgS040.06%,自来水配制。确定最适摇瓶发酵条件为：培养基初始pH值6.0,种龄16h,接种量10%,培养温度30℃,转速200r/min,发酵72h。在经过分子生物学育种和发酵条件优化后,工程菌株JLJ—VHb+的产胶率达到1.713%±0.02%,与优化前的出发菌株相比提高了42%。研究结果表明,导入透明颤菌血红蛋白基因vgb,可明显提高菌株JLJ摄取和利用氧的能力,从而有效地解决了结冷胶发酵后期由于发酵液粘度较高而导致的溶氧不足问题,显著提高了少动鞘氨醇单胞菌JLJ合成结冷胶的能力。这研究为解决多糖微生物发酵生产过程中存在的技术瓶颈问题提供了较好的借鉴。
【作者】姬庆龙；
【导师】苑琳；
【作者基本信息】内蒙古大学，生物工程，2014，硕士
【关键词】少动鞘氨醇单胞菌；结冷胶；透明颤菌血红蛋白；发酵；

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